前花青素的测定方法

鉴定： 
1. 颜色反应：反应后颜色为深红色。将50mg的样品溶于1ml浓盐酸和4ml乙醇的混合溶液中，然后加热，直到混合溶液的颜色变为深红色为止。 
2. 薄层色谱法：吸附剂：硅胶60F251展开剂：乙酸乙酯：甲酸：水=18：1：1（体积比）显色：将磷酸和乙醇按（1：1）的体积比混合，再加入1%的香草醛，喷雾薄层板，加热1分钟，只出现前花青素的红色斑点，继续加热15分钟后，各种单体全部显色。样品：将样品配成25mg/mg的甲醇溶液，取5μl点于薄层板上。薄层色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)>色谱图谱 
Rf 0.62 儿茶素 
0.55 前花青素二聚体 
0.41 前花青素二聚体 
0.34 前花青素三聚体 
0.26 前花青素四聚体 
0－0.2 前花青素寡聚体前花青素含量（Porter 试验）

一、原理：前花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的分子，它氧化水解后能够生成红色的花青素离子。前花青素本身没有颜色，但是经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。Porter试验能够定量测定前花青素在水解过程中生成的花青素离子。

二、方法：试剂：甲醇 正丁醇 盐酸 NH4Fe（SO4）2·12H2O仪器：分光光度计。将10mg样品溶于10ml甲醇中。取上述样品溶液1ml，用甲醇稀释至10ml为待测检液。将正丁醇与38%的盐酸按照95：5的体积比混合后，取出6ml；将NH4Fe（SO4）2·12H2O用浓度为2mol/L的盐酸按照2%（W/V）的比例配制，取出0.2ml，连同前面的6ml一同加到1ml待测检液中，在加盖密封的玻璃容器中（离心管）用沸水浴加热40分钟。如果对加盖的试管进行加热有麻烦的话，可以在沸水浴加热回流。加热40分钟后，立即用冰水冷却试管。在加热完毕后15分钟，于546nm处测吸光度。前花青素所战百分素= 
0.01389－反应混合物中样品的浓度 mg/ml。 
0.366－A1%1cm在546nm处前花青素的吸光度。