液相色谱法分析植物组织多胺含量

多胺是植物体内的具有生理活性的一类有机小分子物质，主要有腐胺（putrecine,put）、尸胺（cadecine,cad）、亚精胺（spermidine,spd）与精胺（spermine,spm）。它们与植物的生长发育关系密切，参与植物细胞分裂、DNA的凝聚及激素的调控[1]等。在环境胁迫下，植物体内大量的积累多胺类物质，在稳定细胞膜、核酸及蛋白质等大分子物质的构象有重要的作用。多胺在人体内也大量存在，并与人类健康息息相关[2] 。饮食是人体内多胺的重要来源之一[3]，准确、快速地检测植物组织中的多胺越来越受重视。

    由于多胺属脂肪族直链胺类，以前主要用氨基酸分析仪、纸电泳等方法测定[4]，不仅样品回收率低而且检测灵敏度也不高。目前多用衍生化的方法，将多胺的一、二级氨基接上荧光或紫外有吸收的基团，通过薄层或液相色谱分离检测，常用的衍生试剂有丹磺酰氯、苯甲酰氯、苯磺酰氯及荧光胺类等[4~8]。

    自从1972年Redmond和Tseng [5]采用苯甲酰化的方法以来，色谱工作者对该方法进行了不断的改进，已经成为较为成熟的检测植物体内多胺的方法。然而在许多细节方面，如反应的时间、副反应的干扰、样品的保存及分离条件的进一步优化等还有很多工作要做。

    实验部分

2. 1 仪器和试剂 Waters 515泵，2487双波长紫外/可见检测器。腐胺、亚精胺为Fluka产品，精胺为Sigma产品，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为国产分析纯。

2. 2 色谱条件 色谱柱：NovapakC18柱（Waters,150×3.9mm,4um）。 流动相：甲醇：水（60：40，v/v），检测波长为230nm，流速0.7ml/min，柱温30℃，Breeze色谱工作软件。

2. 3 材料处理 1.0~2.0g，加入4ml 预冷的5%高氯酸（v/v）冰浴研磨，冰浴浸提1小时后离心（15，000g，30分钟，4℃）。取上清500ul加入10ml 带盖塑料离心管，加入7ul苯甲酰氯，再加入1ml 2M NaOH，涡漩20s后在37℃水浴反应20min。加入2ml 饱和NaCl溶液，混匀后用2ml 乙醚萃取，取1ml 醚相真空干燥，用100ul甲醇涡旋后过0.45um 的滤膜，取10ul进样。

2. 4 标准曲线制作 标准品配成1mmol/L浓度的贮液，各取40ul按2.3的方法进行苯甲酰化。分别取苯甲酰化后的多胺标准液0.03，0.06、0.12、0.25、0.50、0.75、1.0nm/10ul进样，以面积对进样量作曲线。

参考文献

1 赵福庚，刘友良.高等植物体内特殊形态多胺的代谢及调节.植物生理学通讯，2000，36（1）：1~5
2 Tiburcio A F, Altabella T, Flores D et al. Manipulation of polyamines in food plants:chemical
and transgenic approaches,In :Bardóce S,White A（eds）.Polyamines in Health and Nutrition. Klvwer Academic Publishers.1999,161~176
3 吉晓佳，刘友良.植物源食品多胺的作用及其调控.植物学通报（印刷中）
4 Nikolaus S.Thin-layer chromatography and thin-layer electrophoresis of polyamines and their
derivatives,In:Tabor H,Tabor CW（eds）. Polyamines.New York:Academic Press,1983,3~9
5 Redmond JW and Tseng A.High-press liquid chromatographic determination of putrescine,cadaverine,spermidine and spermine .J of chromatography.1979,170 ,479- 481.
6 Flores HE and Galston AW.Analysis of polyamines in higher plants by high performance liquid chromatography.Plant physiol.1982,69:,701-706
7 吴少伯，郭枫.水稻胚和胚乳中多胺液相色谱分离.色谱,1989,7（6）:389~391
8 杜军英，孙秉庸，陈兆珍等.OPA—巯基乙醇柱前衍生反相液相色谱法测定生物组织中多胺含量.解放军高等专科学校学报，1997，（1）：53