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液相色谱法检测利尿剂类药物双氢克尿塞

发布时间:2015-01-08   点击次数:1112次

1. 范围
本方法采用液相色谱法检测尿样中利尿剂类药物。
本方法适用于尿样中的利尿剂双氢克尿塞(Hydrochlorothiazide)的初筛。
检测范围为:200~2000ng/mL尿。
2. 原理
尿中利尿剂类药物多以原型形式存在,可以在酸性和碱性条件下直接进行萃取。基本步骤包括:分别在酸性和碱性条件下萃取,合并后吹干,定容,测定。
3. 试剂和材料
3.1 乙酸已酯
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 盐酸乙胺
3.5 酸性固体缓冲剂(pH约3.5)
分析纯磷酸二氢钾和磷酸氢二钠按重量比99:1混合,pH约3.5。
3.6 碱性固体缓冲剂(pH约9.5)
分析纯碳酸氢钠和碳酸钾按重量比3:2混合,pH约9.5。
3.7 Acetazolamide, Amiloride, Bendroflumethiazide, Bumetanide, Canrenone, Chlortalidone, Clopamide, Ethacrynic acid, Furosemide, Hydrochlorothiazide, Indapamide, Torasemide, Triamterene, Spironolactone, Xipamide等(美国Sigma公司产品)
3.8 乙酸铅溶液,50g/L
3.9 带盖的普通试管
3.10 1ml小瓶
3.11 铝盖(11mm)
3.12 吸液尖,200μL、1mL、5mL
3.13 C18反相液相色谱柱
3.14 往复式振荡器
3.15 旋涡混合器
3.16 离心机
4. 分析仪器
4.1 STI5000液相色谱仪(二元泵),分析柱为HP18(250mm × 0.5mm × 3μm, 填料 为C18 ,粒度为5μm),二极管阵列检测器。
4.2 仪器条件
检测波长为210nm,230nm,275nm,流速为1ml/min,采用磷酸盐缓冲液(A)(pH = 3)和乙腈(B)进行梯度洗脱,
梯度为: 0 min A 85% B 15%
10 min A 70% B 30%
20 min A 65% B 35%
5. 试样制备
检测样:收集的尿样
阳性尿:由成年志愿者口服(个别需静脉注射)利尿剂药物的成品药,收集
相应时间段的尿液。
 6. 操作步骤
 6.1 提取
 
6.1.1酸性提取
于5mL尿样中加入2g酸性固体缓冲剂(pH约3.5)和4mL乙酸乙酯,震荡提取20分钟后离心分离。有机相中加入2mL乙酸铅溶液(50g/L),震荡5秒后离心分离。保留有机相。
6.1.2碱性提取
于5mL尿样中加入2g碱性固体缓冲剂(pH约9.5)和4mL乙酸乙酯,震荡提取20分钟后离心分离。有机相与酸性提取的有机相合并,在50ºC下用氮气流吹干有机相,残渣用500μL甲醇溶解。
 6.2 仪器分析
 
取制备好的试样于液相色谱仪上进样10μL进行分析。
 7. 检测结果
 
将尿样与随行的标准品的液相色谱图及紫外光谱图进行对比,如吻合即可确定该尿样为可疑,从而完成利尿剂的初筛。
  8. 精密度
 
(略)
  9. 参考文献
 
兴奋剂检测的有关规定及相关方法。
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