HPLC 法同时测定头孢拉定和精氨酸的含量

摘要　目的：以HPLC外标法同时测定注射用头孢拉定（含精氨酸）中头孢拉定、精氨酸和杂质头孢氨苄的含量。
方法：采用Spherisorb C18柱，乙腈-醋酸盐缓冲液（12∶88）为流动相，检测波长200 nm。
结果：该法能较好地分离被测组分和有关杂质，被测组分的线性关系良好，回收率满意。
结论：该法专属性好，快速、准确。
注射用头孢拉定为β－内酰胺类抗生素，系头孢拉定与精氨酸或碳酸钠按一定比例组成，中国药典1995 年版二部［1］采用液相色谱法只测定头孢拉定和杂质头孢氨苄的含量，USP［2］ 采用分光法仅测头孢拉定的含量。本文建立了液相色谱外标法，对注射用头孢拉定（含精氨酸）可同时测定头孢拉定、精氨酸和杂质头孢氨苄的含量，被测组分能较好地分离，线性关系良好，回收率满意。该法专属性好、快速、准确，适用于原料合成及制剂分装前生产过程的质量监控。
1　仪器、药品及试剂
STI5000液相色谱仪，P5000单元泵，UV5000紫外可见光检测器，N2000色谱工作站。
注射用头孢拉定（含精氨酸）（批号为9709101、9709111、9709121）由广州白云山制药股份有限公司提供；头孢拉定对照品（批号0427—9703）、7—ADCA对照品均由中国药品生物制品检定所提供；精氨酸工作对照品（含量为98.44％）、双氢苯甘氨酸均为进口样品精制；乙腈，色谱纯；其余试剂均为分析纯。
2　色谱条件
液相色谱仪：STI5000液相色谱仪；色谱柱：Spherisorb C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈－醋酸盐缓冲液（称取醋酸钠0.7 g和冰醋酸0.15 g加水稀释到1000 mL ）（12∶88）；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：200 nm；AUFS：0.5；室温。
3　方法与结果
3.1　系统适用性实验　在本实验流动相系统下，精密称取头孢拉定、精氨酸、头孢氨苄、双氢苯甘氨酸、7-ADCA及乙酰苯胺适量，用流动相溶解，取其溶液 20 μL，进样，色谱图见图1 。可见混合溶液中被测组分与合成原料杂质良好分离。
图1　各组分色谱图
1. 7－ADCA　2. 双氢苯甘氨酸　3. 精氨酸
4. 头孢氨苄　5. 头孢拉定　6.乙酰苯胺
3.2      线性实验　精密称取头孢拉定对照品（含头孢氨苄）和精氨酸工作对照品适量，用流动相分别制成含头孢拉定 111.8、139.7、167.7和195.6 μg.mL-1，含头孢氨苄2.6、3.3、4.0、4.6 μg.mL-1，含精氨酸 67.2、83.9、100.7、117.5 μg.mL-1的混合溶液，精密量取上述各混合溶液20 μL，进样，以各样品浓度对基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积回归，得头孢拉定、头孢氨苄和精氨酸回归方程分别为：
A＝1.964×104C－1.312×104　r＝0.9996
A＝3.152×104C＋1.429×103　r＝0.9994
A＝1.045×104C＋2.341×104　r＝0.9996
结果表明头孢拉定、头孢氨苄、精氨酸分别在110～195 μg.mL-1、2.5～4.5μg.mL-1和 67～117μg.mL-1范围内线性关系良好。
3.3　稳定性实验　在本实验条件下，样品溶液室温放置5 h，测得头孢拉定、精氨酸及头孢氨苄的含量基本不变。
3.4　加样回收试验　精密称取注射用头孢拉定（含精氨酸）约20 mg，依次加入头孢拉定对照品和精氨酸工作对照品适量，用流动相配制成含头孢拉定120 μg.mL-1，含精氨酸 100 μg.mL-1, 含头孢氨苄2.5 μg.mL-1的混合溶液，按样品测定法测定，计算加样回收率及RSD
3.5      样品测定　精密称取头孢拉定对照品约40 mg，精氨酸工作对照品25 mg, 用流动相稀释至50 mL,摇匀，精密量取该溶液5 mL，再用流动相稀释至25 mL，摇匀，作为对照品溶液。另精密称取注射用头孢拉定（含精氨酸）样品约60 mg，用流动相稀释至 50 mL，摇匀，精密量取该溶液5 mL，再用流动相稀释至25 mL，摇匀，作为样品溶液。分别取对照品溶液和样品溶液各20 μL进样，可见样品中<