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液相色谱法测定决明子中蒽醌类成分的含量

发布时间:2010-04-28浏览:1724次

【摘要】   目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采用液相色谱法。色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18柱;流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速:1 ml/min;λ:440 nm。结果该方法准确可靠,重现性好。结论 该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。

  【关键词】  液相色谱法 决明子 蒽醌

  Abstract:ObjectiveTo determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae. MethodsHPLC method was developed .The separation was performed on an ODS column with the phase of CH3OH-0.1% phosphoric acid. The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was 440 nm. ResultsThis method was convenient and reliable. ConclusionThis method can be used to determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae.

  Key words:HPLC;  Semen Cassiae;  Anthraquinones

  决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒,归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效,为临床常用中药[1]。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本实验采用HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量,为决明子中有效物质研究奠定了基础。

  1  仪器与材料

  LC-l0ATvp液相色谱仪(日本岛津公司),AEG-45SM电子天平(十万分之一),大黄素(批号0756200009),大黄酚(批号110796200513),大黄素甲醚(批号07589803)(均购自中国药品生物制品检定所),决明子(重庆合川GAP种植基地,由重庆市中药研究院生药室提供并鉴定),水为重蒸水,甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  对照品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53 mg,大黄酸0.58 mg,大黄素0.55 mg,大黄酚0.53 mg,大黄素甲醚0.58 mg,加甲醇超声溶解,分别定容至5 ml,作为对照品溶液。

  精密吸取上述5种对照品溶液各2.0 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇溶解定容至刻度,即得混合对照品溶液,其浓度分别为芦荟大黄素0.021 2 mg/ml,大黄酸0.023 2 mg/ml,大黄素0.022 mg/ml,大黄酚0.021 2 mg/ml,大黄素甲醚0.023 2 mg/ml。

  2.2  供试品溶液的制备取决明子药材粉末(过4号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加80%乙醇100 ml回流提取至无色,合并提取液,定容至100 ml,精密吸取25 ml提取液,经减压回收后,残渣加浓度为1 mol/L盐酸溶液40 ml回流水解3 h,然后用120 ml氯仿分4次回流萃取,30 ml/次,合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性,回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得[2,3]。

  2.3  色谱条件色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18(6.0 mm ×150 mm,5 um);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速1 ml/min;柱温25℃;检测波长440 nm.

  2.4  标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8 ,10,12 ,14 ,16 μl进样,测定基线构成之面积称峰面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064 Wh/2h>峰面积 ,绘制标准曲线,计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围,结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为:Y = 814521X -20 442,Y = 1 110 506X - 7 296,Y=1431 202X + 4 274,Y =1 739 861X - 24 381,Y = 707 106X - 26 453,其线性范围分别为:0.170~0.339,0.186~0.371,0.176~0.352,0.170~0.339,0.186~0.371  μg。

  2.5   精密度实验精密吸取混合对照品溶液10 μl,进样,测定各峰峰面积,连续测定5次,求得各峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.7%,大黄酸1.8%,大黄素0.6%,大黄酚1.1%,大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。

  2.6  稳定性实验

  2.6.1  对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10 μl,进样,分别于0,2,4,8,12,24 h后重复进样 ,计算各成分峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.9%,大黄酸0.8%,大黄素0.7%,大黄酚1.2%,大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24 h 内基本上是稳定的。

  2.6.2  供试品溶液稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl,进样,分别于0,2,4,8,12,24 h后重复上述操作 ,计算各成分峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.6%,大黄酸0.7%,大黄素1.3%,大黄酚0.6%,大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24 h内基本上是稳定的。

  2.7  重现性实验  精密称取决明子药材5份,照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取供试品溶液10 μl,进样,测定各成分峰面积值,计算各成分平均含量及RSD值分别为:芦荟大黄素为0.0084%,RSD为0.8%;大黄酸为0.0079%,RSD为1.1%;大黄素为0.0313%,RSD为1.2%;大黄酚为0.1732%,RSD为0.7%;大黄素甲醚为0.0883%,RSD为1.3%。结果表明,该方法具有较好的重现性。

  2.8  加样回收率实验  精密称取决明子药材6份,每份约0.5 g,精密称定,分别精密加入大黄酚对照品(50 μg/ml)15  ml。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取供试品溶液10 μl,进样,测定大黄酚的峰面积。结果见表1。

  表1  大黄酚回收率测定结果(略)

  表1表明,大黄酚的平均回收率为100.94%,RSD值为2.12% 。表明该测定方法是合理可行的。

  2.9  样品的含量测定取不同批次决明子药材粉末(过4号筛)各约1 g,精密称定。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取各供试品溶液10 μl,按“2.3”项下色谱条件进样,混合对照品及样品色谱图见图1~2。测定对照成分峰面积,计算含量,即得。测定结果见表2。

  图1  决明子混合对照品色谱图(略)

  图2  决明子药材色谱图(略)

  表2  样品含量测定结果(略)

  3  结论

  结果测得,决明子药材中含芦荟大黄素平均为0.0081%,大黄酸平均为0.007 9%,大黄素平均为0.030 6%,大黄酚平均为0.176 0%,大黄素甲醚平均为0.088 3%。

  本文采用液相色谱法同时测定决明子药材中5种蒽醌类成分的含量,方法简便,分离度好,结果可靠,可用于控制决明子药材的质量。

  【参考文献】

  [1] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:98.

  [2] 杨黎燕.杨秉勤,郎惠云.决明子蒽醌提取方法的研究[J].西部粮油科技,2003,28(2):59.

  [3] 蒋午峻,王 巧,袁志芳,等. 液相色谱法同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚[J].河北医科大学学报,2006,27(4):271.

 

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