首乌藤超微饮片的液相色谱指纹图谱研究

【摘要】 目的研究首乌藤超微饮片的指纹图谱。 方法色谱柱为大连依利特公司Hypersil BDS C18（4.6 mm×200 mm,5μm）。流动相为乙腈-1%冰醋酸,柱温为35℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm，进样量为20μl。结果初步建立了首乌藤超微饮片的HPLC指纹图谱，标定了9个共有指纹峰。结论利用首乌藤超微饮片液相色谱（HPLC）指纹图谱可以较好地反映首乌藤超微饮片的内在质量。

　　【关键词】  首乌藤超微饮片 液相指纹图谱 液相色谱法

　　Abstract:ObjectiveTo determine the HPLC fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori. MethodsChromatographic column was Hypersil BDS C18 （4.6 mm×200 mm,5μm）. phase was acetonitrile-1% glacial acetic acid in water.Column temperature was 35℃, the Flow rate was 1.0 ml·min-1, the detection wavelength was 254 nm and the sample size was 20μl.ResultsThe fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori was established and 9 common peaks were in the fingerprint.ConclusionThe method and data can be used to control the quality of the caulis polygoni multiflori.

　　Key words:Caulis Polygoni Multiflori；  Fingerprint；  HPLC

　　首乌藤为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb. 的干燥藤茎, 具养血安神，祛风通络功能。用于失眠多梦，血虚身痛，风湿痹痛；外治皮肤瘙痒［1］。首乌藤的主要有效成分为大黄蒽醌。本文通过对四川、北京、湖南、江西、南京等10个不同地区的商品首乌藤药材制成的超微饮片进行测定，建立指纹图谱，并对首乌藤超微饮片中大黄素的含量进行了测定。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器

　　液相色谱仪（岛津LC-10ATVP液相色谱仪，紫外检测器SPD-10AVP，岛津色谱工作站），AE240型电子分析天平。

　　1.2  试剂乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析醇，水为重蒸馏水。

　　1.3  对照品大黄素（ 供含量测定用,中国药品生物制品检定所提供）。

　　1.4  药材

　　10批商品首乌藤药材分别购自四川、北京、湖南、江西、南京等地。加工成超微饮片。

　　2  方法与结果

　　2.1  供试品溶液的制备取首乌藤超微饮片，取约0.5 g，精密称定，加甲醇40 ml加热回流提取2次，1 h/次，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，置25 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.2  对照品溶液的制备取大黄素对照品约5 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，摇匀，即得。

　　2.3  色谱条件色谱柱为大连依利特公司Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×200 mm,5 μm）, 流动相为（A）乙腈-（B）1%冰醋酸,柱温为35℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm，进样量为20μl。流动相比例，见表1。表1  流动相比例（略）

　　2.4  方法学考察

　　2.4.1  精密度实验取同一份首乌藤超微饮片的供试品溶液连续进样5次，比较各共有指纹峰的相对保留时间与相对基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间与相对峰面积基本一致，RSD＜2%，见表2～3，符合指纹图谱的检测要求［1］。表2  精密度实验结果（略）表3  精密度实验结果（略）

　　2.4.2  稳定性实验取同一份首乌藤超微饮片的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，6，8 h进样，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜2%，样品在8 h内稳定，符合指纹图谱的检测要求。

　　2.4.3  重复性实验取同一批首乌藤超微饮片样品5份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进行测定，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜2%，符合指纹图谱的检测要求。

　　2.5  指纹图谱的建立

　　2.5.1  共有指纹峰的标定采用相对保留时间标定共有指纹峰，以图谱中大黄素为参照物，将各拖尾峰（tailing peak）。前者少见。>色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间（见表4），计算10批不同地区药材制成的超微饮片指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间，其中9个色谱峰为各样品所有，故标定它们为共有指纹峰。各共有指纹峰的相对保留时间分别为：峰-1（0.112 2）、峰-2（0.155 9）、峰-3（0.251 5）、峰-4（0.267 1）、峰-5（0.380 8）、峰-6（0.404 1）、峰-7（0.447 9）、峰-8（0.535 0）、峰-S（1.000 0）。表4  10批首乌藤超微饮片各共有峰的相对保留时间（略）

　　2.5.2  共有指纹峰的相对峰面积以图谱中大黄素为参照物，将各色谱峰峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为各色谱峰的相对峰面积，见表5。表5  10批首乌藤超微饮片样品部分共有峰的相对峰面积（略）

　　2.6  15批首乌藤超微饮片由于产地不同，其大黄素的含量也有差别见表6。表6  样品的来源及大黄素含量（略）

　　2.7  相似度计算采用中南大学“计算机辅助相似性评价系统”进行相似度计算。10批样品的相似度均在0.9以上。

　　3  讨论

　　超微饮片是我院研制的一种新型饮片，采用指纹图谱技术控制其质量具有较强的专属性。

　　参照物的选择：首乌藤超微饮片中大黄素的含量较高, 因此选择其作为参照物，在图谱中为S号峰。各样品的中的大黄素参照峰是根据其保留时间与大黄素的保留时间基本一致而确定的。

　　色谱柱选择：分别用依利特C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5μm）与 MetaChem C18色谱柱（4.6 mm×200 mm 5μm）两种色谱柱进行首乌藤超微饮片指纹图谱分析，结果表明，依利特C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5μm）分离效果较好，故选择依利特C18色谱柱。

　　测定结果表明不同地区的大黄素含量差异较大，可能是生长条件及加工方法不同而致。应通过对多地区多批次样品进行含量测定，制定适宜的含量限度，确保超微饮片的质量。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［J］.北京：化学工业出版社，2000：201