液相色谱仪测定水产品中孔雀石绿

前言 :孔雀石绿（MG）为三苯甲烷类工业染料, 在水产养殖上可以有效的预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小虫病。并常用于鱼苗的消毒。但一些水产品贩运商为保持水产品新鲜度普遍用MG消毒车厢和活鱼池；酒店为了延长鱼的存活时间也在鱼池中投放MG进行消毒。使用MG消毒后的鱼即使死亡后颜色也较为鲜亮，消费者很难从外表进行辨认。MG在水生生物体中的主要代谢产物为无色孔雀石绿（LMG）。MG具有毒性强、高残留和致畸、致癌、致突变等副作用。LMG由于不溶于水，其残留毒性比MG更强。所以，目前世界上诸如美国、日本、加拿大和欧盟等许多国家已将MG列为水产养殖禁用药物，我国也于2002年5月将其列入“食品动物禁用的兽药及其化合物清单”（1）。虽然MG已被列为水产养殖禁用药物，但因为其价格低廉，同时目前在水霉病防治上尚无其它有效药品，因此仍有一些水产养殖户在普遍使用。

 
   各类水产品中MG和LMG的检测是我国食品卫生学面临的新课题。为此，我国农业部2004年颁布了水产品中MG残留量测定的行业标准检验法-液相色谱法（SC/T3021-2004）（2）；国家质量监督检疫总局和国家标准化管理委员会于2005年亦发布了“液相色谱-串联质谱法”和“液相色谱法”（（GB/T19857-2005）（3）的标准检验法。Chang-Jun Cha等报道了（2001）采用氰基柱的反相液相色谱法和液质联机检测MG（4）。
在上述分析方法中，SC/T3021-2004采用C18柱，等梯度洗脱方式，但需要较大流速（2ml/min）；而 GB/T19857-2005法采用C18柱，梯度洗脱方式。文献（4）采用氰基柱分离的梯度洗脱方式。我们在研究这些分析方法的基础上，采用氰基柱分离、流速为1.0mL/min的等梯度洗脱方式，具有保留时间短、分离效果好、分析速度快、节省试剂；zui低检测浓度无LMG为0.02μg/mL，MG为0.05μg/mL。精密度高；特别是线性范围达0.1μg/mL～160.0μg/mL，远远大于 SC/T3021-2004线性范围（MG 0.01μg/m L～0.4μg/mL；LMG0.02μg/mL～0.40μg/mL）。而且，等梯度洗脱方式又扩大了液相色谱的应用范围。现将结果报告如下：
1.      材料与方法
1.     1材料
1.1.1试剂
    乙睛 色谱纯，fishte ；
    乙酸铵 ，hplc纯 ，DIKMA；
    孔雀石绿（MG） sigma试剂；
    无色孔雀石绿（LMG）  sigma试剂。
0.125mol/L乙酸铵溶液  称取乙酸铵9.64 g，用纯水溶解并定容至1000mL。用0.45μm滤膜过滤。
MG标准储备液  准确称取孔雀石绿0.100 0g，用乙睛溶解并定容至100 mL。该标准溶液浓度为1mg/mL。避光、冰箱冷冻层保存。    
MG标准应用液 吸取1mg/mL孔雀石绿标准储备液用乙睛稀释至1.0μg/mL。
LMG标准储备液 准确称取孔雀石绿0.100 0g，用乙睛溶解并定容至100mL。该标准溶液浓度为1mg/mL。
    LMG标准应用液  吸取1mg/mL无色孔雀石绿标准储备液用乙睛稀释至1.0μg/mL。
MG和LMG标准混合溶液  分别吸取MG和LMG标准储备液，用乙睛稀释成不同浓度的标准混合溶液。
1.1.2 仪器
  液相色谱仪。具UV-VIS、在线脱气机、高压泵、柱恒温箱、色谱工作站。
1.2 步骤
1.2.1 色谱条件
   检测器  紫外-可见光检测器，波长618nm；
   色谱柱  氰基柱，4.6mm×250mm，5μm；
   流动相  乙睛-0.125mol/L乙酸铵（pH4.5）=（47+53）；
   柱温  35℃；
   进样量  20μL。
1.2.2  测定步骤
吸取MG和LMG标准混合溶液（5.0μg/mL）注入色谱仪，在上述色谱条件下，绘制色谱图。见图1。